乳糖和蔗糖的液相色谱检测

乳糖和蔗糖的检测

摘要：本实验根据中国药典2010版二部乳糖项下测试方法，采用液相色谱 （HPLC） 法结合示差折光检测器分离乳糖与蔗糖，并选择了4种不同类型的氨基柱对乳糖和蔗糖的保留及分离情况进行了考察。结果表明：流动相为乙腈:水=75:25（v/v），使用Innoval NH₂色谱柱（5 μm，100Å，4.6×250 mm） 对两种物质的分离度为2.44，实现了乳糖和蔗糖的良好分离，且各物质峰形良好，保留时间稳定，能够满足药典要求。

关键词：液相色谱法；示差检测器；乳糖；蔗糖；氨基柱；

前言

乳糖是一种双糖，由一分子β-D-半乳糖和一分子α-D-葡萄糖在β-1，4-位形成糖苷键相连，有两种端基异构体：α-乳糖和β-乳糖，在水溶液中可互相转化。α-乳糖很容易结合一分子结晶水。乳糖甜度约是蔗糖的六分之一。蔗糖容易被酸水解，水解后产生等量的D-葡萄糖和D-果糖，其不具有还原性。发酵形成的焦糖可以用作酱油的增色剂。乳糖作为一种药用辅料，以填充剂或稀释剂的形式广泛应用于片剂、胶囊、颗粒剂和冻干产品中。然而，一般药用乳糖来源于牛奶，可能存在可引起过敏反应的杂蛋白。因此，2010版药典增加了乳糖的检查项内容。本实验以药典为依据，实现了乳糖与蔗糖的良好分离。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

1.1.1 主要仪器设备

液相色谱仪，示差检测器

1.1.2 试剂材料

超纯水；乙腈（色谱纯）；蔗糖和乳糖（客户提供，分别加水溶解并稀释成浓度为10 mg/mL的储备溶液）

色谱柱1-6：规格均为5 μm，100Å，4.6×250 mm

1.1.3 色谱条件

流动相：A-水，B-乙腈，A:B=75:25 （v/v）；

流速：1.0 mL/min；

柱温：室温；

进样量：10 uL；

2 结果与讨论

本实验对比了六种色谱柱对乳糖及蔗糖的分离效果，由表1及图1-5可知，依据2010版药典，流动相为乙腈:水=75:25（v/v），柱温为室温时，采用Innoval NH₂色谱柱分离效果，分离度为2.44。

表1. 不同氨基柱及HILIC色谱柱乳糖与蔗糖分离测试数据对比（乙腈：水=75：25）