液相色谱仪测定葛根素含量

葛根为豆科植物野葛 Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根,是常用中药材,具有解肌退热，生津，透疹，升阳止泻功效，用于外感发热头痛、项背强痛，口渴，消渴，麻疹不透，热痢，泄泻，高血压颈项强痛等[1]。现代研究证实，葛根中的主要有效成分为葛根素等异黄酮类化合物，具有抗炎解热、扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量的作用，同时也有降低血压的作用。有关葛根中葛根素等异黄酮的含量测定研究已有不少报道[2-5]，但对葛粉中葛根素含量测定报道不多。本文对葛粉中葛根素的提取条件和测试条件等进行比较研究,并采用液相色谱法对葛粉样品进行了定量分析, 结果令人满意。

  　 1 实验部分

  　 1.1 仪器与试剂

  　 LC－10tvp液相色谱仪；SPD－10T紫外检测器；N2010色谱工作站，岛津UV－265紫外分光光度仪，多功能榨汁机/搅拌机SG300－I。甲醇（色谱纯），水（二次蒸馏），其余均为分析纯。葛根素对照品（中国药品生物制品检定所）；鲜葛。

  　 1.2 色谱条件

  　用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱Vertex C18 (150×4.6mm I.D)，MeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）为流动相，紫外检测波长250nm。

  　 2 结果与讨论

  　 2.1 提取溶剂浓度的选择

  　精密称取同一样品约0.1g,分别加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml，超声提取60分钟，进样5ul,比较峰面积，实验结果表明30%乙醇提取。

  　 2.2 超声提取时间的选择

  　精密称取同一样品约0.1g,分别加30%乙醇10ml，超声提取30分钟、45分钟、60分钟，进样5ul,比较峰面积，实验结果表明超声60分钟为*提取条件。

  　 2.3 流动相及流速的选择

  　 试验时曾采用下述流动相进行测定：甲醇－水（25：75）、甲醇－水－醋酸（30：70：0.5）、甲醇－水（30：70）为流动相，结果采用甲醇－水－冰醋酸（30：70：0.5）为流动相，样品分离好。而流速也以1.0ml/min为合适。

  　 2.4 标样溶液的制备

  　称取一定量葛根素对照品,用30%乙醇溶解配制成浓度为13ug/ml的葛根素标准液。

  　 2.5 葛粉制备

  　取鲜葛用水洗净切片,称取20g放入搅拌机内，搅拌三次，每次1分钟，每次加水200ml， 150ml，100ml，合并浆汁放置二天，去掉上面的水，下面的粉浆用定量滤纸过滤，低温干燥，放入干燥器中备用。

  　 2.6 供试品溶液制备

  　称取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超声提取1h,滤纸过滤,滤液过0.45um滤膜作为供试品溶液。

  　 2.7 线性关系考察

  　 在上述色谱条件下，分别进标样溶液0.5、3、5、7、10μl，测得各峰面积。以葛根素为横座标（A），以峰面积（Y）为纵座标，计算得回归方程：Y=3.90×106x+728.14,相关系数r＝0.9999；结果紫外检测葛根素在0.0065-0.13μg范围内呈良好线性关系。

  　 2.8 精密度试验

  　取上述标样溶液，连续进样5次，测定，RSD为1.11%。

  　 2.9 重复性试验

  　取同一样品重复测定5次，RSD为1.61%。

  　 2.10 稳定性试验

  　取上述供试品溶液，0、2、5、7、10h进样，RSD为2.1%，10小时内进样稳定。

  　 2.11 回收率试验

  　 取已知含量的样品，分别加入葛根素标样，按上述方法测定5次，平均回收率为98.6%, RSD为1.76%。见表1。

  　 2.12 样品分析

  　精密吸取标样溶液5μl与供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，结果:葛粉中葛根素的含量为0.06%（n=3），见下图。

  　 3 讨论

  　本文采用液相色谱法测定葛粉中葛根素的含量,方法简单、快速、准确，结果满意，可用于葛粉中葛根素的含量测定。